细胞迁移侵袭实验中基质胶的应用

基质胶是从富含胞外基质蛋白EHS小鼠肿瘤中提取出的可溶性基底膜制备物，其主要成分由层粘连蛋白，Ⅳ型胶原，硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（HSPG）和巢蛋白等组成，还包含生长因子如TGF-beta、EGF、IGF、FGF、组织纤溶酶原激活物和EHS肿瘤自身含有的其他生长因子。

在1980年代中期由丹麦的 J. Engelbreth-Holm和Richard Swarm二者分别发现并具体描述基质胶^【1】，其主要生产过程是用盐水提取/洗涤肿瘤匀浆后可溶性蛋白质，再用溶剂萃取产物中不溶性复合物，在低温下使用缓冲液进行透析后获得无色到淡黄色溶液。

表：基质胶组分^【1】

基质胶为组织和细胞提供支撑、抗拉强度和支架支撑，也可以作为细胞粘附和运动的三维亚结构以及生长因子、趋化因子和细胞因子的储存库，同时可作为细胞形态发生和分化的信号等。

翌圣生物开发生产的CeturegelTM基质胶不含LDEV（乳酸脱氢酶增高病毒），超低内毒素含量，并全部经过支原体检测保证无支原体污染，包括基本浓度、高浓度、低生长因子等不同类型基质胶。

应用方向

产品特点

特点：

• 安全性高：不含LDEV（乳酸脱氢酶增高病毒）

• 浓度多样性：浓度范围在8~20 mg/ml之间

• 批次稳定性好：严格生产质检过程保证批次间性能稳定

• 低内毒素：内毒素含量≤4 EU/ml

• 污染物检测： 经检测无支原体和细菌、真菌残留

• 单批产量高：单批产量在L级别以上

• 兼容性好：可与任何类型的细胞培养基兼容
  
  
  

迁移侵袭验证

图：迁移侵袭实验过程

1 基质胶铺板

首先将拿到的CeturegelTM基质胶冻融后按照原液1:8用无血清培养基稀释（终浓度不要超过3mg/ml）来包被Transwell小室底部膜的上室面，置37℃、30min使CeturegelTM基质胶聚合成凝胶，使用前进行基底膜水化。

2 制备细胞悬液

1将细胞饥饿12-24h以去除血清的影响（可选）。

2消化细胞，终止消化后离心弃去培养液并用PBS洗1-2次，用含BSA的无血清培养基重悬调整细胞密度至4×104~2×105个/ml。

3 细胞接种

1取细胞悬液100μl加入Transwell小室。

2在24孔板下室加入600μl含20%FBS培养基，添加时要避免下层培养液和小室间产生气泡，产生气泡易使下层培养液的趋化作用减弱甚至消失。

3培养细胞:常规培养12-48h(时间主要依癌细胞侵袭能力而定)。

4 结果统计

1取出Transwell小室，弃去孔中培养液，用不含钙的PBS清洗2遍，4%多聚甲醛固定30分钟，将小室适当风干。

2然后使用0.1%结晶紫染色20 min，用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞，用PBS洗3遍于400倍显微镜下随即五个视野观察细胞，记数。

图：细胞侵袭后经结晶紫染色的结果

FAQ

Q1拿到的基质有色差的变化（淡黄色到深红色）是什么原因？

A对于含酚红的基质胶主要原因是由于酚红和碳酸氢盐与CO2作用引起的，但是与5％CO2平衡后色差即会减少。冻融后，轻轻摇晃试剂瓶使基质胶分散均匀。

Q2基质胶的操作要注意哪些事项？

A所有操作需在无菌环境下进行，应使用预冷的移液器以保证基质胶呈匀浆状。

Q3基质胶的如何分装冻存使用？

A可将冻融后的CeturegelTM基质胶分装在多个小管，所有分装均需用预冷的冻存管，迅速冷冻并保存，避免多次冻融。所有涉及到使用的物品在使用前需预冷，使用预冷的移液管、吸头及小管等操作基质胶。

[1] Kleinman H K , Martin G R . Matrigel: basement membrane matrix with biological activity.[C]// Seminars in Cancer Biology. 2005.

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