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Bioss 新品推荐 | KO细胞系产品以及KO技术服务项目隆重上线!

作者:北京博奥森生物技术有限公司 暂无发布时间 (访问量:2913)

 

技术介绍

      CRISPR/Cas9 是一种基于细菌天然免疫机制开发出来的基因编辑技术,用于抵御病毒等外来物入侵的一种防御机制。经改造的CRISPR系统主要由Cas9蛋白和单链向导RNA(sgRNA)组成,其中sgRNA对靶序列进行特异性识别,Cas9蛋白负责对识别的靶序列进行切割,从而实现DNA的双链断裂。

      DNA双链断裂后,细胞对DNA的损伤修复机制就会被激活。目前主要有两种修复机制,非同源末端连接(NHEJ)修复和同源重组介导的修复(HDR)。没有外源模板时,机体主要进行NHEJ修复。NHEJ修复过程中,会在切割位点随机的进行缺失或插入碱基序列,导致DNA移码突变,从而使基因不能正常表达。存在外源模板的情况下,机体会启动HDR修复来实现基因的精准插入或者替换。

KO 细胞系的应用

      目前,利用CRISPR-Cas9构建基因敲除(KO)细胞系的技术已经越来越成熟,那么KO细胞系的应用有哪些?可以帮助我们解决什么问题呢?

基因功能研究
      由于模式生物基因组测序系统的逐渐完善,使CRISPR/Cas9技术在基因组中同时进行多靶位点的编辑成为可能。研究表明将缺失突变引入不同基因的编码外显子中,可以在人细胞中当做强大的阴性和阳性筛选对照。与先前的 RNAi 技术的脱靶严重、编辑效率低及仅限于转录过程相比,CRISPR/Cas9技术介导的筛选可更好的实现专一性和敏感性,设计的sgRNA可以靶向任何 DNA 序列。RNAi 方法只导致基因表达抑制,而CRISPR/Cas9技术产生的Indels可以致使基因功能丧失,比RNAi 出现更加明显的表型,这更容易鉴定目的基因。

药物靶点的确定
      利用CRISPR-Cas9技术建立基因缺失病变的KO细胞模型,有助于研究疾病的发病机制和筛选潜在的药物靶点,并通过高通量药物反应数据,初步筛选出在特定药物处理下细胞存活率变化显著的细胞系,进而评估药物对特定基因敲除细胞的影响,从而筛选出有效的药物候选物。从基因的功能研究到药物靶点的筛选,再到药物效果的评估及验证,KO细胞系提供了一个强有力的实验平台,加速了新药的研发进程。
同时,KO细胞系不仅在细胞层面上有所应用,还可以用于构建动物模型,进一步研究药物在体内的作用机制和治疗效果,尤其是在遗传性疾病的治疗研究中发挥着巨大作用。

抗体的特异性鉴定
      抗体是生命科学研究中的常用试剂之一,抗体的特异性对研究者们至关重要。抗体的特异性是指抗体能够识别并结合到其目标抗原的能力,而不与其他非目标分子发生交叉反应。特异性抗体可以减少实验中的误差,降低了非目标分子的干扰,有助于提高实验的可重复性,使实验结果更加可靠。
      目前,基因敲除验证(KO)是广受信任且接受度最为广泛的抗体特异性验证方法之一。利用CRISPR-Cas9技术,构建目的基因缺失的KO细胞系。如果抗体是特异性的,那么不应该检测到信号,而在野生型(WT)细胞系中则应该检测到特异性靶蛋白的信号。KO细胞系提供了真正意义上的阴性对照,一度被称为“抗体特异性验证的金标准”,以确认抗体对目标蛋白的特异性。

PART.1 隆重推出 KO 系列产品

同时提供KO细胞系以及对应的KO裂解液



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KO验证的特异性抗体

 

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PART.2 CRISPR/Cas9基因敲除技术服务

服务编号:SV1501

 

一、服务内容与流程

服务内容:

Tip: 请您填写项目申请表,以便Bioss为您提供更好的技术服务。

 服务流程:

1.客户提供需要敲除的指标信息,与公司商定具体的制备项目、数量和费用,双方签订《委托CRISPR/Cas9基因敲除服务合同》。

2.双方确定合作细节,实验过程中及时反馈实验进程,并按照规定时间完成委托服务。并向客户提供委托产品与实验报告。

 

二、技术流程

1.RNP转染法

 

2.质粒转染法

 

三、案例结果展示

 

四、服务优势

1.两种敲除方法(质粒法和RNP法)可供客户选择。

2.每个靶标设计多条sgRNA,提供多种敲除策略,最大限度的提高的KO效率,提高蛋白水平的敲除概率。

3.通过Sanger测序后,多种软件分析编辑效率,提高编辑结果的准确性。

4.不同的细胞系具有专属的转染方案,提高靶标编辑的效率。

 

 

 

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