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细胞水平的研究,比基因和蛋白水平的研究往往更进一步。体外细胞培养可以获得大量的细胞和其代谢产物,通过对细胞的增殖能力,周期变化,凋亡程度,侵袭、迁移能力等指标进行检测后
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我们利用重亚硫酸盐使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶,再进行PCR扩增,甲基化的位点可以被当作一个C/T的SNP来处理;可利用直接测序法来判断是否CpG位点发生甲基化。
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载体采用Pol II启动子表达人工设计的微小RNA (miRNA), 后者从长的转录本被加工,进而导致特异性的mRNA的降解。
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化学合成的siRNA具有操作简便、转染效率高、对细胞的或者组织的毒副作用小、可大规模制备等优点,特别适用于基因靶位点不确定情况下,进行siRNA有效片段的筛选。
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