蛋白质分子量测定是生物医学研究、蛋白质组学和药物开发中的关键实验步骤。为了确保测定的准确性和可靠性，研究人员应遵循一套系统的方法。以下是 10 个关键步骤，可有效提高蛋白质分子量测定的精确度：

1、 确定合适的测定方法

不同的实验需求适用于不同的测定方法。常见的蛋白质分子量测定技术包括：

（1）质谱法（MALDI-TOF-MS, ESI-MS）——适用于高精度分子量测定

（2）尺寸排阻色谱（SEC-MALS）——适用于蛋白质复合体和聚集体分析

（3）SDS-PAGE——适用于粗略估算分子量

（4）超速离心分析（AUC）——适用于蛋白质的真实分子量测定

根据研究目标选择最适合的技术，可以避免实验资源的浪费。

2、 样品准备与纯化

样品纯度对测定结果有直接影响。确保蛋白样品：

（1）纯度高于 90%（避免干扰信号）

（2）去除表面活性剂（如 SDS、Triton-X）

（3）降低盐浓度（如 Tris, NaCl），避免离子对测定的影响

如果蛋白纯化不足，建议使用亲和层析、离子交换层析或凝胶过滤层析 提高样品质量。

3、 确定蛋白质的溶液条件

蛋白质的溶解状态影响测定的准确性。建议：

（1）溶剂选择：使用适当的缓冲液（如 PBS、HEPES）避免蛋白沉淀

（2）避免蛋白聚集：可加入适量 DTT（降低二硫键影响）

（3）优化 pH 和温度：防止蛋白变性或降解

适当的溶液优化可以提高蛋白的稳定性，从而提高测定精度。

4、 确保样品浓度适当

不同测定方法对蛋白浓度要求不同：

（1）质谱法（MALDI-TOF-MS）：10-50 μg

（2）SEC-MALS：0.5-5 mg/mL

（3）SDS-PAGE：0.1-1 mg/mL

过高的浓度可能导致聚集，过低的浓度可能导致信号偏弱。因此，在测定前应通过Bradford 法或 UV-Vis 分光光度法 进行浓度测定和校准。

5、 选择适当的标准品

为了保证测定的准确性，应使用合适的蛋白标准品进行校准。例如：

（1）SDS-PAGE 可使用 蛋白标准分子量 Marker（如 10-250 kDa 范围）

（2）质谱分析 可使用 BSA（牛血清白蛋白）或 Myoglobin（肌红蛋白） 作为内标

（3）SEC-MALS 需要选择与目标蛋白相近的标准蛋白，以减少分子形态影响

合适的标准品可以帮助校准设备，确保测定数据的可靠性。

6、 进行实验测定

根据所选方法进行测定时，需注意：

（1）MALDI-TOF-MS：使用合适的基质（如 α-氰基-4-羟基肉桂酸）提高蛋白离子化效率

（2）SDS-PAGE：确保电泳电压和时间合适，避免蛋白扩散

（3）SEC-MALS：流速和洗脱条件需优化，以防止峰形拖尾

合理的实验参数设置可减少系统误差，提高数据可重复性。

7、 进行数据分析与计算

实验获得的数据需要正确分析和处理。例如：

（1）质谱法：使用峰值（m/z）计算蛋白的分子量，并去除噪音峰干扰

（2）SDS-PAGE：利用对数标准曲线计算分子量，并进行条带对比

（3）SEC-MALS：分析光散射曲线，计算分子量及聚集状态

避免直接依赖仪器计算结果，而应结合实验背景进行合理判断。

8、 结果验证与重复实验

实验误差和偶然误差可能影响测定准确性，因此建议：

（1）重复测定至少 3 次，计算平均值并计算标准差

（2）对比不同测定方法，如 SDS-PAGE 和质谱数据是否匹配

（3）使用不同设备测试，验证数据的一致性

多角度的验证可提高测定数据的可靠性。

9、 避免常见测定误差

导致蛋白质分子量测定不准确的常见原因包括：

（1）样品变性：避免高温、极端 pH 或化学降解导致蛋白变性

（2）蛋白聚集：使用低浓度样品，避免非特异性相互作用

（3）盐浓度过高：去除过量盐分，以减少电离抑制现象（质谱法）

通过优化实验条件，可以减少数据误差，提高测定准确度。

10、 记录实验参数并撰写报告

在完成测定后，应详细记录：

（1）实验步骤、试剂配方和实验条件

（2）测定设备和参数设定（如激光能量、流速、缓冲液等）

（3）数据分析方法和最终结果

在科研论文或实验报告中，这些数据可以提高实验的可重复性，同时也有助于后续实验的优化。

蛋白质分子量测定的精度直接影响科研和生物制药领域的实验结果。通过遵循这 10 个关键步骤，研究人员可以提高数据准确性，减少实验误差，并确保测定结果的可靠性。如果您希望获得高精度蛋白质分子量测定，可以选择专业的实验服务。百泰派克生物科技的MALDI-TOF-MS 质谱测定服务，提供从样品处理到数据分析的一站式解决方案，助力科研工作顺利进行。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

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