常温运输

🔹常温运输通常采用不透气瓶进行运输，待细胞生长至70-80%左右，镜下观察细胞状态无异常即可；

🔹将准备好的细胞灌满培养液，瓶口拧紧，缠上封口膜并用一次性自封袋包装放入特制泡沫盒即可运输；

🔹寒冷地区以及冬季运输需要长效高温暖宝宝维持细胞温度。

常温运输收货注意事项：

（1）及时拍摄培养瓶外观记录有无瓶子破损漏液的情况，去掉封口膜，75%酒精消毒瓶身后放入37℃培养箱静置3-4h。

（2）在显微镜下观察细胞状态，同时对细胞进行不同倍数拍照保存（4×，10×，20×各2-3张），作为售后依据。

（3）悬浮细胞和半贴壁半悬浮细胞离心运输的灌液培养基收集细胞。

（4）部分贴壁细胞有脱落或脱落后成团的现象，需离心瓶中灌液的培养基收集细胞。贴壁细胞镜下观察若密度低于60%，可弃除培养基后加入5-8mL新鲜完全培养基，放入培养箱继续培养；若密度达80%以上，可对细胞进行传代处理。收到货后第一次建议1:2的比例传代。

（5）运输过程中的灌液培养基不能再用来培养细胞，需更换新鲜完全培养基。

（6）夏季部分地区温度较高，常温发货细胞不能在没有空调的地方房太久，会影响细胞代谢，并且有微生物污染风险，一定注意无菌操作。

干冰运输

🔹细胞扩增好做完一系列检测和鉴定后冻存至工作细胞库；

🔹定期复苏检查细胞状态，准备两管放入自封袋贴好标签，埋入放满干冰的泡沫箱内即可打包。

干冰运输注意事项：

（1）开箱后核对细胞信息，将冻存管置于干冰上拍照留存，夏季气温较高，干冰易挥发，收到货后若干冰已经挥发干或冻存管破损开裂，请及时拍照与我们联系。

（2）若当天不复苏，请将细胞转移到液氮罐或-80℃冰箱中。

（3）干冰发货为两只冻存管，请先拿出一管复苏，另一管放入液氮保存，复苏第一管有问题及时与我们沟通，在技术支持指导下复苏第二管。

储存方式

当细胞汇合度达到80%-90%，即可传代培养或冻存。

收集细胞：

贴壁细胞：1、吸去培养液，加入不含钙镁的PBS，轻轻润洗瓶底1-2次，吸弃PBS；2、加入0.25%胰酶-EDTA消化液（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），铺匀瓶底放入培养箱中消化1-2min；（部分细胞贴壁较牢，可采用分步消化：将消化下来的细胞转移至离心管终止，在培养瓶中加入胰酶继续消化，直至大部分细胞脱落）3、倒置显微镜下观察大部分细胞变圆脱落，迅速加入完全培养基终止消化，完培与胰酶比例为2:1；4、轻轻吹打细胞后吸出转移至离心管中。

悬浮细胞及半贴半悬细胞注意收集上清。

离心：收集好的细胞在1000rpm条件下离心3~5min，离心好后弃除上清液。

冻存液重悬：细胞按照传代步骤收集细胞至离心管并计数，根据计数的密度决定细胞冻存数量，一般推荐细胞冻存密度为1×106-1×107个活细胞/管。离心后弃上清，加入配制好的冻存液重悬，分配到冻存管中，每管1mL。

冻存：将冻存管放入程序降温盒中进行梯度降温，然后放入-80℃冰箱降温，24h后将冻存管转入液氮罐中。若没有冻存盒，可于冰箱4℃放置30min，随后转移至-20℃冷冻2h，接下来将其放于-80℃超低温冰箱中过夜，最终放置于液氮中以长期保存。

通过以上步骤和注意事项，可以有效保证细胞在寄送过程中的稳定性和活性，从而确保实验结果的可靠性和可重复性。