辣根中含有一种过氧化物酶，分子小，稳定好，活性高。在生物及医学领域有大本领，下面我们来一探它的真面目吧。

HRP简介

HRP中含有血红素，能利用H2O2氧化许多有机及无机化合物，被发现广泛分布于植物界，其中辣根（辣根是一种常年生香草，在世界大部分温和地区都有种植）中含量非常高，故名辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase,HRP）。HRP是由无色的酶蛋白和棕色的铁卟啉结合而成的糖蛋白，糖含量18%。活性高，稳定，分子量小，纯酶容易制备，所以常用于生物及医学领域。

HRP由多个同工酶组成，分子量为40,000，等电点为PH3～9，酶催化的最适PH因供氢体不同而稍有差异，但多在PH5左右。酶溶于水和58%以下饱和度硫酸铵溶液。HRP的辅基和酶蛋白最大吸收光谱分别为403nm和275nm，一般以OD403nm /OD275nm的比值RZ（德文Reinheit Zahl）表示酶的纯度。高纯度的酶RZ值应在3.0左右（最高可达3.4）。RZ值越小，非酶蛋白就越多。

根据RZ值，有以下这些用途：

1） RZ>3 活性 >250u/mg， 主要应用于免疫学，是高纯度的过氧化酶。采用特殊色谱纯化技术以除去会影响免疫学反应的同工酶B .

2） RZ>2 活性 >180u/mg ，主要应用于临床化学，我们的客户也有将这个规格的产品应用于免疫学研究的。此时，一个标准化的分析方法就变得尤为重要。

3） RZ>1 活性 >100u/mg，主要应用于血糖试纸和尿液分析试纸。

4） RZ>0.6 活性 >60u/mg ，主要应用于尿液分析试纸。

免疫学中的应用


HRP（辣根过氧化物酶）可催化ECL等化学发光试剂产生化学反应发光，或催化DAB，TMB等底物显色。HRP标记可以直接用于免疫学实验，省却中间二抗步骤；在双加心ELISA中也应用最为广泛。

发光原理

（1）发光过程：在化学发光酶免疫分析（CLEIA）中，使用过氧化物酶标记抗体，进行免疫反应后，利用鲁米诺作为发光底物，在过氧化物酶和起动发光试剂（NaOH和H2O2 ）作用下鲁米诺发光，酶免疫反应物中酶的浓度决定了化学发光的强度。

（2）常用底物：鲁米诺(32氨基邻苯二甲酰肼,luminol),或其衍生物如异鲁米诺(42氨基邻苯二甲酰肼),是一类重要的发光试剂。

（3）发光条件：鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行, 在过氧化物酶及活性氧[过氧化阴离子,单线态氧,羟自由基,过氧化氢]存在下,生成激发态中间体, 当其回到基态时发光,其波长为425nm。

（4）研究发展：传统的化学发光体系（HRP- H2O2 -LUMINOL）为几秒内瞬时闪光，存在发光强度低、不易测量等缺点。 后来，在发光系统中加入增强发光剂，以增强发光信号，并在较长的时间内保持稳定，便于重复测量，从而提高分析灵敏度和准确性。

产品推荐

博奥龙的HRP标记试剂盒采用改良的碘氧化法活化辣根过氧化物酶（HRP），经过氧化以后活化的HRP可以与待标记物的游离氨基结合，发生希夫碱反应（Schiff's Base Reaction）。本品适用于带有游离氨基的物质的标记，比如：带有游离氨基（伯胺）的小分子化合物，蛋白或抗体。



有效期12个月（HRP有效期12个月）

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